脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织LKB1/MPK信号通路的变化

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌物质代谢相关通路LKB1/AMPK的变化。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组、脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p AMPK)、肝脏激酶B1(LKB1)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织AMPK、p AMPK、LKB1蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织AMPK、p AMPK mRNA表达水平显著下降(P<0.05),AMPK、p AMPK蛋白表达水平亦明显下降(P<0.01);与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织LKB1mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论:心肌组织LKB1/AMPK信号通路相关分子表达下调可能为脾虚痰浊证的分子生物学基础。     

ICU脓毒症患者发生再喂养综合征的危险因素分析及预测模型建立

  目的  探讨ICU脓毒症患者发生再喂养综合征（RFS）的相关危险因素,以此为基础建立RFS的预测模型。  方法  回顾性分析昆明医科大学第一附属医院ICU 2020年11月至2022年1月期间收治的202例脓毒症患者的临床资料,根据“ASPEN关于RFS共识建议中”诊断标准,将患者是否发生RFS,分为RFS组（n = 141）和非RFS组（n = 61）;比较2组间性别、体重指数（BMI）、营养风险筛查、营养方式、相关危重评分、腹内压（IAP）、相关实验室检查及用药的差异。选取统计学方法中的单因素和多因素Logistic回归分析筛选出ICU脓毒症患者发生RFS的独立危险因素,根据分析结果建立一种预测模型,绘制出受试者工作特征曲线（ROC）评价RFS的预测模型对ICU脓毒症患者发生RFS的预测价值。  结果  202例脓毒症患者相关资料分析,单因素分析结果显示:体重指数（BMI）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）、肌酐-身高指数（CHI）、血清钠（Na+）、血清钾（K+）、血清镁（Mg2+）、血清磷（P-）、白介素-6（IL-6）、空腹血糖（FBG）、维生素B1（VitB1）、糖化血红蛋白（HbA1c）、是否使用利尿剂、是否使用胰岛素等指标差异有统计学意义（P < 0.05）;多因素分析结果显示:利尿剂的使用、BMI、CHI、血K+、FBG、VitB1是ICU脓毒症患者发生RFS独立危险因素。  结论  以多因素筛选出独立危险因素为基础,建立预测模型表达式为:Logit = 1.39×利尿剂+0.15×BMI-0.14×CHI＋0.75×血K+-0.16×FBG+0.78×VitB1-2.94。通过回归分析建立的预测模型一致性强,联合预测有较好的预测价值。     

基于血浆渗透压建立急性ST段抬高型心肌梗死重症患者发生院内死亡风险预测模型

  目的   建立并验证血浆渗透压对急性ST段抬高型心肌梗死（acute ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI）重症患者院内死亡风险预测模型。  方法  通过回顾性分析患者电子病历资料,选取2015年1月至2020年12月于云南大学附属医院心血管内科住院的STEMI重症患者,提取患者的一般信息、实验室检查、合并疾病及用药情况等,筛选STEMI重症患者院内死亡风险危险因素并建立预测模型。  结果  利用LASSO回归及多因素Logistic回归筛选出白蛋白（ALB）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）、血肌酐（Scr）、是否服用他汀类药物、是否服用血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）或血管紧张素转化酶受体拮抗剂（ARB）类药物、血浆渗透压为STEMI重症患者是否发生院内死亡的独立预测因子（P < 0.05）,据此7个预测变量绘制列线图,模型检验结果显示其区分度、校准度较好,决策曲线分析（DCA）显示阈值概率5%～95%时,临床使用该模型是可以获益的。  结论  构建的包含7个变量预测模型具有较好的区分度和校准度,可作为评估STEMI重症患者院内死亡风险参考工具。     

基于循环microRNAs预测模型在子痫前期早期诊断中的应用

目的 探讨基于循环microRNAs预测模型在子痫前期早期诊断中的应用价值。方法 选择2019年1月—2021年6月于海南医学院第二附属医院产科行产检并具有子痫前期危险因素的孕妇(孕周≥20周)246例作为研究对象,根据妊娠期间是否诊断为子痫前期分为子痫组、非子痫组。检测2组孕妇循环microRNAs含量、外周血可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)、胎盘生长因子(PlGF)及子宫动脉搏动指数(UTPI),比较2组患者临床资料。通过Logistic回归分析影响子痫前期发生的相关因素,使用列线图构建基于循环microRNAs含量的预测模型并验证可行性。受试者工作特征曲线(ROC)分析预测模型与sFlt-1/PlGF对子痫前期的预测效能。结果 孕妇246例发生子痫前期71例。子痫组子痫家族史、高血压、肾脏疾病、24 h尿蛋白≥0.3 g占比及平均动脉压(MAP)显著高于非子痫组,PLT及Alb低于非子痫组[χ~2(U)/P=10.894/<0.001、13.518/<0.001、8.573/0.003、28.612/<0.001、3.510/<0.001、4.371/<0.001、7.039/<0.001]。子痫组患者miR-16、miR-21、miR-31、miR-495水平低于非子痫组,而miR-136、miR-494水平高于非子痫组(U/P=3.999/<0.001、7.614/<0.001、10.239/<0.001、2.709/0.007、2.492/0.013、3.719/<0.001)。子痫组患者UTPI及外周血sFlt-1、sFlt-1/PlGF水平显著高于非子痫组,而PlGF显著低于非子痫组(U/P=5.114/<0.001、2.359/0.025、5.805/<0.001、2.104/0.039)。Logistic回归分析显示,PLT高、Alb高、miR-21高及miR-31高是影响子痫前期发生的独立保护因素[OR(95%CI)=0.964(0.938~0.991)、0.782(0.673~0.908)、0.384(0.215~0.685)、0.199(0.097~0.409)],而24 h尿蛋白≥0.3 g、UTPI高、sFlt-1/PlGF高则是影响子痫前期发生的独立危险因素[OR(95%CI)=14.821(3.794~24.593)、35.601(1.291~981.401)、2.391(1.431~3.998)];根据上述影响因素构建的列线图模型预测子痫前期的C-index为0.947(95%CI 0.902~0.979),一致性及区分性均良好。ROC曲线分析显示,列线图模型的预测效能高于sFlt-1/PlGF(Z=6.504,P<0.001),敏感度、特异度均显著高于sFlt-1/PlGF(χ~2/P=20.218/<0.001、14.464/<0.001)。结论 基于miR-21及miR-31构建的列线图模型对子痫前期具有较好的预测价值。     

基于数据库构建乳腺癌焦亡相关基因的预后风险模型

目的 探究焦亡相关差异表达基因(DEGs)在乳腺癌中预后价值并构建预后风险模型。 方法 从癌症基因组图谱(TCGA)和肿瘤基因表达数据库(GEO)官网下载乳腺癌的基因测序、临床数据,筛选焦亡相关DEGs。将乳腺癌患者进行聚类分析。在TCGA队列中以最小绝对收缩和选择算子(LASSO)方法建立模型。利用Kaplan-Meier生存曲线、受试者工作特征曲线(ROC)、单因素及多因素Cox回归独立预后因素分析等评价该模型。GEO队列为验证集。通过GO、KEGG、ssGSEA分析风险DEGs的富集情况。 结果 筛选出焦亡相关DEGs,聚类分析可见C2组总生存期(OS)延长,差异有统计学意义(P=0.020)。该模型K-M生存分析显示,高风险组OS缩短(TCGA队列中P<0.001,GEO队列中P=0.018)。ROC曲线下面积(AUC)表明该模型具有一定预测能力。单因素、多因素Cox回归分析表明,年龄、M、N分期和风险评分为OS的独立预测因子。GO、 KEGG富集与ssGSEA分析证实了风险相关DEGs与免疫炎症因子和通路有关。 结论 本研究构建了由9个焦亡相关基因组成的乳腺癌预后风险模型,为乳腺癌患者的风险预后评估提供了参考。     

糖尿病下肢深静脉血栓的临床预测模型的建立与验证*

目的: 构建糖尿病患者发生下肢深静脉血栓风险的临床预测模型,为临床提供预警。方法: 选取同济大学附属同济医院2018年11月至2021年11月的住院患者共281例,其中明确诊断糖尿病患者合并下肢深静脉血栓的111例患者作为试验组,明确诊断糖尿病无下肢深静脉血栓的170例患者作为对照组。对该模型进行评价,使用最小绝对收缩和选择算子(lasso)回归模型对糖尿病下肢深静脉血栓风险模型的特征选择进行优化。应用单因素和多元Logistic回归分析,将lasso回归模型中选取的特征相结合,建立预测模型诺模图(nomogram)。使用C指数、校准曲线图和决策曲线分析来评估预测模型的区分性、校准和临床实用性。结果: 单因素分析结果显示两组患者年龄、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白、纤维蛋白原、凝血酶原时间、D2聚体、血红蛋白、C反应蛋白、总蛋白、中性粒细胞数、淋巴细胞数、碱性磷酸酶、谷草转氨酶存在显著差异(P＜0.05)。多因素分析结果显示年龄、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、D2聚体、C反应蛋白、碱性磷酸酶、淋巴细胞数、谷丙转氨酶为糖尿病患者合并下肢深静脉血栓的独立相关因素。该模型具有良好的区分性,C指数为0.928,具有良好的校准性,受试者曲线显示良好的预测能力。结论: 本研究构建的nomogram结合了年龄、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、D2聚体、血红蛋白、C反应蛋白、碱性磷酸酶、谷草转氨酶,可以方便准确地对糖尿病合并深静脉血栓的风险预测。     

产后压力性尿失禁风险预测模型的外部验证研究

背景本研究团队前期分别开发了针对初产妇和经产妇的产后压力性尿失禁（SUI）风险预测模型,旨在早期识别孕产妇SUI的高危人群并提供有效干预,但尚未进行外部验证。目的外部验证前期开发的产后SUI风险预测模型,探索该模型在临床应用的可能性。方法于2020年7—9月在南方医科大学深圳医院、香港大学深圳医院进行电话随访,通过电子病历系统选取产后6个月的产妇作为验证组进行产后SUI风险预测模型的外部验证。使用电子医疗记录收集研究对象年龄、身高、妊娠前体质量、流产史和分娩史的相关信息;并通过电话随访调查研究对象产后6个月SUI发生情况。采用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）和Hosmer-Lemeshow拟合优度检验分别评价产后SUI风险预测模型区分度和校准度。结果最终纳入298例研究对象为验证组,其中初产妇203例（68.1%）,经产妇95例（31.9%）。初产妇队列中,非SUI者158例,SUI者45例。经产妇队列中,非SUI者72例,SUI者23例。产后SUI风险预测模型在初产妇外部验证人群中AUC为0.719〔95%CI（0.643,0.795）〕,在经产妇外部验证人群中AUC为0.833〔95%CI（0.738,0.928）〕。Hosmer-Lemeshow拟合优度检验提示产后SUI风险预测模型在初产妇人群中校准欠佳（χ2=34.11,P<0.001）,而在经产妇人群中拟合度良好（χ2=9.62,P=0.293）。结论初产妇产后SUI预测模型能有效区分患者是否发生产后SUI,但尚需进一步更新以提高模型的外部适用性;经产妇产后SUI预测模型具有可接受的外部效能,鼓励将其作为产后早期盆底康复干预的评估工具进行推广。     

利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系

目的：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因编辑的长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)细胞系,为构建新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 型(se- vere acute respiratory syndrome coronavirus type 2,SARS-CoV-2)不易感猪模型提供实验材料。方法：①利用生物信息学方法对大鼠和鸡的ACE2氨基酸序列进行比对,将大鼠ACE2与SARS-CoV-2 S蛋白相互作用的关键氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计嵌合的ACE2基因并构建ACE2基因敲入供体。②设计并合成靶向猪ACE2基因的sgRNA,克隆到pX330载体上构建ACE2基因打靶载体。③将ACE2打靶载体和ACE2基因敲入供体以及Neomycin抗性质粒共转染至长白猪PFF细胞,筛选G418抗性单细胞克隆并进行测序鉴定。结果：根据氨基酸序列比对结果,将大鼠ACE2蛋白的第19、31、34、35、42、353、354位氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计合成了嵌合的ACE2基因。G418抗性单细胞克隆基因型分析结果显示获得了阳性单细胞克隆。结论：利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源ACE2基因敲除、嵌合ACE2敲入的长白公猪PFF细胞系,为构建SARS-CoV-2不易感猪模型奠定了基础。     

CALB2介导的肿瘤微环境免疫细胞浸润在肝癌复发中的作用机制分析

[摘要] 目的 利用生物信息学技术分析筛选出与肝癌复发相关的核心基因及信号通路,为探索肝癌复发的分子机制提供理论依据。方法 从TCGA和GEO数据库下载肝癌相关数据集,利用edgeR算法筛选差异表达基因。选择关键基因后,应用LASSO-Logistic回归分析构建复发预测模型。 ssGSEA、CIBERSORT和MCP算法用于评估免疫浸润细胞。结果 共筛选出343个复发相关差异表达基因。富集分析表明,大多数基因富集于细胞分化、跨膜转运蛋白、转运乙酰胆碱复合物。蛋白质-蛋白质相互作用网络分析确定了 12 个关键基因。然后,通过 Lasso-logistic 回归分析确定了一个独立的风险评分模型,其中包括3个基因 SST、CALB2 和 DRD2。该风险评分显示出较好的预测能力,并且还构建了基于风险评分的临床列线图。此外,证明了CALB2在肿瘤组织中低表达,与肿瘤微环境中的免疫浸润细胞呈正相关。结论 复发相关基因模型可以提供较好的预测患者复发的能力,其中的核心基因CALB2 可以在肝癌复发中发挥关键作用。